pcr實驗室和疾控中心的整體解決方案有哪些

發(fā)布日期：2020-10-23 作者：點擊：

一、 臨床基因擴增檢驗實驗室（PCR實驗室）

PCR實驗是指以臨床診斷治療為目的，以擴增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術。專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進行擴增的方法，測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點。因此被臨床醫(yī)生廣為認可，已廣泛應用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是，這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。

近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視，因為它對檢測結(jié)果的可靠性、準確性和安全性起到至關重要的作用。本文主要從定量PCR實驗室的平面布局，定量PCR實驗室基本流程進行了介紹。

二、 PCR實驗室平面布局

普通PCR實驗室通常設置分為四個獨立的工作區(qū)域：試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。新型冠狀病毒檢測采用的熒光定量PCR檢測方法中定量PCR實驗室通常設置分為三個獨立的工作區(qū)域：試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增和產(chǎn)物分析區(qū)，即普通PCR實驗室后兩個區(qū)合并。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑制備區(qū)→樣本制備區(qū)→核酸擴增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。

三、定量PCR實驗基本流程

1、試劑貯存和準備區(qū)

該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

2、標本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。

3、反應混合物配制和擴增以及擴增產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行DNA或cDNA擴增和擴增片段的測定。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。

四、污染的預防與控制

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應是預防，而不是排除。
1、工作區(qū)域的嚴格劃分
（1）各個實驗區(qū)域設置合理；
（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等），以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。
2、合理的系統(tǒng)設置
（1）合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；
（2）嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
3、規(guī)范的操作
（1）臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓，經(jīng)培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；
（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；
（3）清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
4、嚴格的管理
（1）嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；
（2）在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服（如不同顏色），當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域；
（3）盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
（4）擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；
（5）擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應特別注意實驗人員的安全防護。
5、完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈工作臺、離心機、加樣器等。